趙用賢，字汝師，江蘇常熟人。
父親承謙，廣東參議。
趙用賢隆慶五年(1571)中進士，選為庶吉士。
萬曆初年，授職檢讨。
張居正父親死後不服喪，趙用賢上疏說：“我暗暗感到奇怪，張居正能以君臣大義效忠數年，卻不能以父子之情稍盡心一日。
我又暗地裡奇怪，張居正的名望以數年累積而成，陛下卻讓它毀于一旦。
不如像前朝的楊溥、李賢那樣，讓他暫時回去服喪，規定日期回來補缺，讓他們十九年未見面的父子，能在撫棺恸哭的那一刻稍稍緩解心中的痛苦。
國家設立台谏是為了整肅法紀，糾正過錯，現在卻因為恐懼威權請輔臣留下，違背公衆的輿論而徇私情，蔑視人倫的純厚性情而創立怪異之論。
我愚蠢地暗自擔心士風将日益頹靡，國家大事将日益混淆了。
”疏奏上後，與吳中行同被廷杖除去官籍。
趙用賢身體本來肥胖，巴掌大的肉因潰亂而掉落，他的妻子把肉曬幹藏了起來。
趙用賢有個女兒許配給吳之彥的兒子吳鎮。
吳之彥害怕連累自己，趕緊結交張居正，得到巡撫福建之職。
經過家門，不向趙用賢行禮，而且讓吳鎮坐在他弟弟的下面，說“是婢女之子”，以此激怒趙用賢。
趙用賢很憤怒，已察覺他是受張居正的黨徒王..的指使，于是把禮金退還，回絕了這門親事，吳之彥大喜。
張居正死後的第二年，用賢起用為舊職，升右贊善。
江東之、李植等争相接見他，他的威望很高。
但趙用賢性格剛直，恃才傲物，多次品評大臣的得失，申時行、許國等忌恨他。
正好李植、江東之攻擊申時行，許國竭力抨擊李植、江東之，暗地裡卻責怪趙用賢、吳中行，說：“過去專權在權貴，現在卻在下僚；昔日小人颠倒是非，現在卻是君子。
意氣用事，偶然做成一、二件事，就自負得不得了，與浮淺、喜愛生事的人相呼應，黨同伐異，行私罔上，這種風氣不能助長。
”于是趙用賢上疏辯白、請求離職，極力說明朋黨之論的危害，在于小人以此趕去君子，使國家人才一空。
言詞很激憤，皇上不準他離去，朋黨之争從此開始。
不久，他充任經筵講席，又升